Medios de Cultivo y Coloración de Gram

Integrantes:
Tatiana Benalcazar 
María Fernanda Paz

En nuestra vida diaria nos encontramos en contacto con microorganismos que pueden causar problemas para la salud, de allí la importancia de limpiar los objetos de uso diario, de lavarse las manos con agua y jabón y de limpiar diariamente el servicio higiénico.

  

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que creen las condiciones para el desarrollo de los microorganismos. Las bacterias obtienen del medio las fuentes de carbono, nitrógeno, fósforo, potasio, sodio, magnesio y otras sustancias necesarias para su nutrición.

Figura 1. Medio de cultivo de agar sangre.

Para la recolección de muestras se emplean varios instrumentos y materiales como: estufa, asa de platino, portaobjetos, mechero, agua destilada, bandeja de soporte para realizar tinciones, soporte para portaobjetos, reactivos para la tinción de gram, hisopos, bata de laboratorio, cofia, mascarilla y guantes.

Estufa.

Es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbilógico. La estufa mantiene la temperatura, humedad, dióxido de carbono y oxígeno en su atmósfera interior en un adecuado nivel.

Figura 2. Estufa.

Asa de Platino.

El asa bacteriológica o asa de platino es un instrumento de laboratorio que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino que termina en un arito de 5 mm.

Figura 3. Asa de platino.

Mechero.

Un mechero o quemador Bunsen es un instrumento utilizado para calentar y esterilizar, provee una transmisión muy rápida de calor intenso en el laboratorio. Es un quemador de gas natural o de gases licuados procedentes del petróleo como propano y butano,  la llama es el resultado de la combustión de aire con uno de estos gases.

Figura 4. Mechero Bunsen.

Normas que se deben seguir al trabajar con cultivos en el laboratorio.

v  Usar una bata de laboratorio para protegerse de contaminaciones químicas o biológicas.

v  Al trabajar con un mechero de gas o Bunsen se debe mantener una llama de color azul para que pueda esterilizar adecuadamente.

v  Trabajar siempre cerca de la llama del mechero para prevenir riesgos al abrir y cerrar los envases que contienen las muestras.

Figura 5. Asepsia en el Laboratorio.

Toma de muestras
Se recogieron muestras del aula, del baño, lentes, lengua, celular, manos sin lavar y del aliento.
Las muestras se recogieron empleando hisopos estériles en un medio de cultivo de agar sangre compuesto de sangre de cordero, empleando la técnica de inoculación por estrías. Las cajas petri fueron llevadas a una estufa a una temperatura de 37°C.

Figura 6. Toma de Muestra de Celular.

Figura 7. Toma de Muestra de la Mano.

Desarrollo Bacteriano en los Cultivos.

Las muestras recolectadas en el aula de clases en el medio de cultivo de agar sangre observadas a las 24, 48 y 72 horas, las bacterias crecieron a partir del primer día y continuaron multiplicándose sus colonias en los días siguientes, la muestra que presentó un gran desarrollo fue la tomada en el baño, la muestra del aula y de las manos sucias también desarrolló varias colonias bacterianas, después siguió la muestra de lentes y en la muestra de la lengua se observó el desarrollo de una única colonia.

 Figura 8. Muestra Tomada del Aula del Primer Día.

Figura 9. Muestra Tomada del Aula del Segundo Día.

Figura 10. Muestra Tomada del Aula del Tercer Día.

Figura. 11. Muestra Tomada de la Lengua del Tercer Día.

Figura. 12. Muestra Tomada de los Lentes del Tercer Día.

Figura 13. Muestra Tomada de Manos sin Lavar del Tercer Día.

Figura 14. Muestra Tomada de Celular del Tercer Día.

Técnica de Elaboración de Frotis Bacterianos.

El procedimiento que se utilizó para fijar las muestras bacterianas en los portaobjetos o también conocido como frotis bacteriano se indica a continuación:

v  Rotulación de Portaobjetos.

Figura 15. Rotulación de Portaobjetos.

v  Estirilización del asa en el mechero.

Figura 16. Asa Esterilizada en el Mechero.

v  Extensión de la muestra sobre un portaobjetos.

Figura 17. Extensión de la Muestra con el Asa.

v  Se fija la muestra en el portaobjeto con calor, pasándolo tres veces sobe la flama del mechero en forma rápida.

Figura 18. Fijación de la Muestra Sobre la Flama del Mechero.

Proceso de tinción de gram

v  Colocar violeta de genciana o cristal violeta por un minuto en el portaobjeto.

Figura 19. Primer Paso para la Coloración de Gram con Violeta Cristal.

v  Lavar con agua destilada el portaobjeto.

Figura 20. Portaobjetos con Violeta Cristal Lavado con Agua Destilada.

v  Vertir la solución mordiente de lugol por un minuto en el portaobjeto.

Figura 21. Segundo Paso para la Coloración de Gram con Lugol.

Figura 22. Coloración de Gram con Lugol.

v  Lavar con agua destilada el portaobjeto.

Figura 23. Portaobjetos Lavado con Agua Destilada.

v  Colocar alcohol acetona durante treinta segundos en el portaobjeto.

Figura 24. Coloración de Gram con Alcohol Acetona

v  Lavar con agua destilada abundantemente el portaobjeto

v  Colocar safranina por un minuto en el portaobjeto.

Figura 25. Coloración de Gram con Safranina.

v  Dejar secar al ambiente.

Figura 26. Placas se Secan sobre un Soporte.

Visualización en el microscopio.

La diferenciación de las bacterias se efectúo empleando el método de tinción de gram para reconocer a las bacterias gram positivas y gram negativas. Las bacterias grampositivas tienen el citoplasma teñido uniformemente de un color violeta o azul, presentan una pared celular  más gruesa. Las bacterias gramnegativas se tiñen de color rojo debido al colorante de safranina, tienen una pared celular más delgada y tienen un contenido lipídico diez veces mayor que el de las grampositivas, lo cual dificulta la tinción y retención del colorante en el citoplasma.

Figura 27. Visualización en el Microscopio.

Figura 28. Staphilococos Gram Positivos (Sp) en Cadena en la Muestra Tomada del Baño.

Figura 29. Variedad de Escherichia Coli en la Muestra Tomada del Baño.

Figura 30. Clostridium (Sp) en Gemación y Micelios en la Muestra Tomada de Manos Sin Lavar.

Figura 31. Staphilococos Gram Positivos en la Muestra Tomada del Aula.

Figura 32. Staphilococos Aureus Gram Positivos en la Muestra Tomada de Lentes.

Figura 33. Clostridium (Sp) en la Muestra Tomada de Lentes.

Resultados

Los resultados obtenidos en la realización de toma de muestras en medios de cultivo de agar sangre, se resumen en la siguiente tabla.

Tabla. 1. Resumen de Bacterias Encontradas.

Cultivos.	Tipos de Bacterias.	Tinción de Gram.
Aliento.	Clostridium (Sp).	Gram Positivos.
Aula de Clase.	Staphilococos (Sp).	Gram Positivos.
Aula de Clase.	Hongos.	Gram Positivos.
Baño.	Staphilococos (Sp).	Gram Positivos.
Baño.	Variedad de Escherichia Coli.	Gram Negativos.
Baño.	Hongos.	Gram Positivos.
Celular.	Staphilococcus Aureus.	Gram Positivas.
Celular.	Clostridium (Sp).	Gram Positivos.
Manos sin Lavar.	Cocos (Sp)	Gram Positivos.
Lengua.	Cándida (Sp).	Gram Positivas.
Lentes.	Staphilococcus Aureus.	Gram Positivas.
Lentes.	Clostridium (Sp).	Gram Positivas.
Manos sin Lavar.	Clostridium (Sp).	Gram Positivos.

Conclusiones.

v  Se conoció y comprendió la forma de investigar a las bacterias a través de métodos sencillos y fáciles.

v  Se entendió la técnica de recolección de muestras en un medio de cultivo solido de agar sangre.

v  Se aprendió el procedimiento de frotis bacteriano en los portaobjetos para transferir las bacterias y poder analizarlas.

v  Se identificaron las bacterias Gram positivas y negativas mediante el proceso de coloración.

v  Se concientizó a las personas acerca de las bacterias que habitan en varios sitios y elementos de uso diario y de la importancia del aseo para eliminar a las bacterias.

v  Se presentó una mayor cantidad de colonias en el cultivo recogido en el baño y se encontraron hongos, cocos gram positivos y variedad de la Escherichia Coli.

v  El segundo cultivo con una cantidad grande de bacterias correspondió a la muestra tomada en el aula.

v  En la muestra recogida en la lengua se presentaron varias colonias similares del tipo gram positivas como es la cándida (sp).

v  En la muestra del aliento no hubo un gran desarrollo de bacterias y se presentaron gram positivos del tipo clostriidum.

v  En la muestra del baño se presentaron gram positivos tipo clostridium, staphilococos gram positivos y escherichia coli.

v  En la muestra de la mano sin lavar se presentaron gram positivos tipo clostridium y staphilococos gram positivos (sp ) Y bacilos G negativos ( sp )+.

v  En la muestra del celular se presentaron colonias gram positivos del tipo staphilococos aureus. 

v  En la muestra de lentes se presentaron gram positivos tipo clostridium y staphilococos gram positivos tipo staphilococo aureus.

Recomendaciones. 

v  Lavarse las manos frecuentemente con agua y jabón para evitar la propagación de bacterias. 

v  Lavar y desinfectar los baños diariamente con dos paños diferentes y tapar la taza del baño cuando se jala la cadena para evitar la dispersión de Escherichia coli en el aire.

v  Limpiar los lentes diariamente y lavarlos con agua y jabón frecuentemente.

v  Utilizar gel desinfectante en las manos después de salir del baño y al utilizar objetos que tienen manipulación por muchas personas.

v  Limpiar diariamente los objetos a los que estamos expuestos habitualmente para evitar riesgos de  contraer enfermedades e infecciones.

 Figura 34. En el Laboratorio Clínico.